磁珠法總RNA提取試劑盒（預(yù)分裝）

產(chǎn)品介紹 

磁珠法總RNA提取試劑盒，為客戶提供一套從動物組織、植物組織、培養(yǎng)細(xì)胞、細(xì)菌中純化完整、高質(zhì)量的總RNA。試劑盒采用獨特的緩沖液系統(tǒng)， 快速裂解細(xì)胞，沉淀蛋白，再經(jīng)過醇介導(dǎo)將核酸分子結(jié)合于納米磁珠表面，再經(jīng)DNA酶I處理去除基因組DNA，最終得到純度高，完整性好的總 RNA。可用于RT-PCR、Real-Time PCR、芯片分析、Northern雜交等多種下游實驗。

注意事項

1 使用前檢查各組分是否出現(xiàn)沉淀。若有，請輕輕搖晃混合均勻，或37℃水浴重新溶解。

2 β-巰基乙醇請4℃保存，使用前在RNA裂解液中加入560μl β-巰基乙醇至終濃度為4%，加入β-巰基乙醇的RNA裂解液于4℃保存，有效期6 個月。

3 戴一次性干凈手套和口罩操作，防止皮膚、唾液和實驗室用品上存在的RNase污染。

4 使用無菌無RNase的塑料制品和槍頭。

5 若使用玻璃器皿須經(jīng)過0.1% DEPC水在37℃下浸泡12小時，然后經(jīng)過 121℃高壓滅菌30分鐘，烘干后使用。

6 配制相關(guān)的試劑必須使用經(jīng)過121℃高壓滅菌的0.1% DEPC水。

使用流程

樣本預(yù)處理

1 組織樣品 取10-20mg動物組織，置于液氮中迅速研磨成粉末，立即加入200μl RNA裂解液（已加入β-巰基乙醇），也可將組織置于離心管中，迅速加入 200μl RNA裂解液（已加入β-巰基乙醇），用普通玻璃勻漿器或者電動勻漿器將組織徹底研磨均勻。 

2 細(xì)胞樣品 收集2-5×106個細(xì)胞。 對于貼壁細(xì)胞，吸棄培養(yǎng)液，加入200μl RNA裂解液（已加入β-巰基乙醇）。用槍頭反復(fù)吹打混勻直至細(xì)胞團(tuán)消化不見為止，轉(zhuǎn)移到干凈的離心 管內(nèi)。 對于懸浮細(xì)胞：5000rpm（~3056×g）離心5min，吸棄培養(yǎng)液，收集細(xì)胞，每2-5×106個細(xì)胞加入200μl RNA裂解液（已加入β-巰基乙醇）。 用槍頭反復(fù)吹打混勻直至看不到細(xì)胞團(tuán)為止。 

3 植物組織樣品 將液氮研磨好的植物粉末立即轉(zhuǎn)移到 RNA裂解液(已加入β-巰基乙醇)中，按照每10-20mg加入200μl RNA裂解液（已加入β-巰基乙醇）， 用移液器吹打均勻至無明顯的粉末團(tuán)。

4 細(xì)菌樣品 用100μl新鮮配制的含溶菌酶的TE緩沖液重懸細(xì)菌沉淀。革蘭氏陽性細(xì)菌可使用3mg/ml(終濃度)的溶菌酶，輕輕混勻，室溫孵育 5-10min，加入200μl RNA裂解液（已加入β-巰基乙醇），用槍頭吹打混勻；革蘭氏陰性細(xì)菌則采用0.4mg/ml(終濃度)的溶菌酶，輕輕敲打 混勻，室溫孵育3-5min。加入200μl RNA裂解液（已加入β-巰基乙醇），用槍頭吹打混勻。

自動化法提取-MagET? Smart 16

1 向處理好的樣品勻漿液中加入400μl RNA中和液，混勻。室溫放置3-5min。如果動物組織樣品來源比較珍貴，可以選擇裂解物加入 RNA中和液后置于70℃加熱5min，提高RNA得率。 

2 室溫，12,000rpm（~13,400×g）離心1min，小心吸取上清液到新的1.5ml無核酸酶的EP管中。 

3 取出MagET? 總RNA預(yù)分裝試劑板，顛倒混勻數(shù)次使磁珠重懸，輕甩MagET? 總RNA預(yù)分裝試劑板使試劑及磁珠集中到孔板底部。

注:使用前小心撕去鋁箔封口膜，避免MagET? 總RNA預(yù)分裝試劑板劇烈振動，防止液體濺出。 

4 按如下比例配制DNase I反應(yīng)混合液，并輕輕混勻。

5 將50μl DNase I反應(yīng)混合液加入到MagET? 總RNA預(yù)分裝試劑板的的第3, 9列內(nèi)。 

6 在MagET? 總RNA預(yù)分裝試劑板的第2, 8列中加入全部上清液，將MagET? 總RNA預(yù)分裝試劑板置于MagET? Smart 16 的底座上。

注 ：請在加樣后半小時內(nèi)上機(jī)運行程序。 

7 將MagET? 8孔磁棒套插入MagET? Smart 16的磁棒套架卡槽內(nèi)。 

8 選擇程序并運行，自動化程序結(jié)束后，取下MagET?8孔磁棒套丟棄，拿出MagET? 總RNA預(yù)分裝試劑板，使用移液器取出第6,12列 樣品于新的離心管中，即得總RNA產(chǎn)物。如不能及時進(jìn)行下游試驗，總RNA樣本可短期保存于-80℃。

表1.MagETTM Smart 16 程序設(shè)定