磁珠法植物基因組DNA提取試劑盒(預分裝)
產品線 | 產品目錄名稱 | 規格 | 貨號 | 目錄價 |
核酸提取純化 | 磁珠法植物基因組DNA提取試劑盒(預分裝) | 64 T | BK0026-01 | 445 |
產品介紹
磁珠法植物基因組DNA提取試劑盒為經濟植物樣本的基因組DNA快速制備提供了一個簡單快速的解決方案。該試劑盒采用獨特的緩沖液系 統,充分裂解植物細胞釋放基因,再通過醇介導將基因結合于納米磁珠表面,經洗雜液洗去蛋白等雜質,最后在低鹽條件下洗脫得到高純的基因 組DNA。提取過程無需使用有毒的酚、氯仿抽提,也無需進行耗時的醇類沉淀。提取的產物可用于PCR、載體構建、核酸雜交、高通量測序、轉基 因檢測等下游實驗。
試劑名稱 | 64 T |
裂解液 PA | 25 ml |
裂解液 PB | 3.5 ml |
RNase (20 mg/ml) | 2.8 ml |
DTT | 1.2 ml |
沉淀緩沖液 | 9 ml |
MagET? 植物DNA預分裝試劑板 | 1*4 |
MagET? 8孔磁棒套 | 2*4 |
注意事項
1 使用前檢查各組分是否出現沉淀。若有,請輕輕搖晃混合均勻,或37℃水浴重新溶解。
2 RNase(20mg/ml) 請置于-20℃保存。
3 使用前請將1ml DTT全部加入到裂解液 PA中去,并置于4℃保存,保質期6個月。
4 沉淀緩沖液使用前請放置冰上預冷。
使用流程
樣本預處理
1 對于纖維含量高的植物組織樣本,將樣本加入液氮研磨或使用組織研磨杵研磨成粉末;對于纖維含量低的植物組織,將組織剪碎成小塊。
2 稱取預處理好的植物組織樣本50-100 mg,迅速將樣本加入預先裝有裂解液 PA(已加入DTT)的離心管中,用槍頭吹打均勻后,依次加入 40 μl RNase(20mg/ml) 、50 μl 裂解液 PB 渦旋混勻,65℃孵育10-30 min。種子樣本建議起始用量10 mg。
3 向上一步離心管中加入130 μl 沉淀緩沖液,震蕩混勻,直至出現沉淀。
4 12,000 rpm(~13,400×g),離心5 min,使用移液器小心將全部上清轉移到新的離心管中。
自動化法提取- MagET? Smart 16
1 取出MagET? 植物DNA預分裝試劑板,顛倒混勻數次使磁珠重懸,輕甩MagET? 植物DNA預分裝試劑板使試劑及磁珠集中到孔板 底部。
注:使用前小心撕去鋁箔封口膜,避免MagET? 植物DNA預分裝試劑板劇烈振動,防止液體濺出。
2 將之前預處理的全部上清液轉入MagET? 植物DNA預分裝試劑板的第2,8列,將MagET? 植物DNA預分裝試劑板置于 MagET? Smart 16底座上。
注:請在加樣后1 h內上機運行程序。
3 將MagET? 8孔磁棒套插入MagET? Smart 16核酸提取儀磁棒套架卡槽內。
4 選擇程序并運行,自動化程序結束后,取下MagET? 8孔磁棒套丟棄。取出MagET? 植物DNA預分裝試劑板,使用移液器從MagET? 植物DNA預分裝試劑板的第6,12列吸取出洗脫產物,即得植物基因組DNA。如不能及時進行下游試驗,DNA樣本可短期保存于-20℃
表1.MagETTM Smart 16 程序設定
流程 | 工作孔位 | 名稱 | 時長 | 幅度 | 頻率 | 磁吸時間 | 轉移等待 | 溫度 | 加熱時間 |
1 | 1 | 取磁珠 | 1min | 最大 | 最快 | 60s | 0 | - | 0 |
2 | 2 | 結合 | 5min | 較大 | 較快 | 90s | 0 | - | 0 |
3 | 3 | 洗雜 | 1min | 較大 | 較快 | 60s | 0 | - | 0 |
4 | 4 | 洗雜 | 1min | 較大 | 較快 | 60s | 0 | - | 0 |
5 | 5 | 洗雜 | 1min | 較大 | 較快 | 60s | 120s | - | 0 |
6 | 6 | 洗脫 | 5min | 較大 | 較快 | 90s | 0 | - | 0 |
7 | 1 | 棄磁珠 | 1min | 最大 | 最快 | 0 | 0 | - | 0 |