快速堿性磷酸酶

Alkaline Phosphatase (Fast)

產品簡介：

Alkaline Phosphatase (Fast)可催化DNA、RNA以及核苷酸5'端和3'端磷酸基團的水解，也能夠去除蛋白磷酸基團，但不能催化磷酸二脂及磷酸三脂的水解。在37℃的條件下作用10分鐘，該酶即可使所有類型DNA的末端去磷酸化。由于該酶在FastCut 酶切Buffer中具有100%活性，且失活條件為80℃溫育20分鐘，因此與FastCut快速內切酶進行“酶切-去磷酸化”反應時，可在同管內完成，大大簡化了實驗流程。

產品組成：

保存條件: 

-20℃保存，2年有效。

活性定義:

37℃條件下，Alkaline Phosphatase緩沖液環境中，10 min內能夠將1 μg線性化pUC57 DNA的5'末端去磷酸化所需要的酶量定義為1個活性單位（U）。

核酸內切酶殘留檢測：

將酶液與超螺旋質粒DNA在37℃溫育4 h，通過DNA電泳檢測質粒無變化。

核酸外切酶殘留檢測：

將酶液與雙鏈DNA底物在37℃溫育16 h，通過DNA電泳檢測雙鏈DNA底物無變化。

宿主檢測：

將酶液中殘留的核酸經E.coli 16S rDNA特異性的Taq Man qPCR檢測，E.coli基因組殘留低于10拷貝。

使用方法：

1. 質粒載體線性化與去磷酸化同步反應流程

① 于冰上配制如下反應體系：

a. 為了保證去磷酸化的效率，質粒DNA應不含RNA和基因組DNA污染。

② 充分混勻并瞬離，37℃溫育15~30 min。

注：如果延長溫育時間，可能產生星號活性。

③ 80℃溫育20 min，以終止反應。

2. 核苷酸去磷酸化的實驗流程

該方案適用于去除DNA的3'和5'端磷酸基團。

① 于冰上配制如下反應體系：

② 充分混勻并瞬離，37℃溫育10 min。

③ 80℃溫育20 min，以終止反應。

3. 蛋白質去磷酸基團的實驗流程

① 于冰上配制如下反應體系：

② 充分混勻并瞬離，37℃溫育1 h；

③ 添加EDTA至50 mM的終濃度，或者添加釩酸鈉（Na₃VO₄）至 10 mM的終濃度，以終止反應。

注：以上為蛋白質去磷酸基團的反應體系和實驗流程的舉例，實驗時請根據具體底物類型調整Alkaline Phosphatase的使用量以及最佳溫育時間。

注意事項：

1.      與Alkaline Phosphatase結合的DNA在瓊脂糖凝膠中可能會出現條帶偏移或彌散，為避免此現象，可在樣品中加入混有SDS的6× Loading Buffer，先在80℃溫育20 min，冰浴降溫后再進行電泳。

2.      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

本產品僅用于生命科學研究，不得用于醫學診斷及其他用途！