T7核酸內切酶I

T7 Endonuclease I 

產品簡介：

T7 Endonuclease I (T7 Endo I, T7EI)，中文名稱T7核酸內切酶I，可識別并切割不完全配對DNA、十字型結構DNA、Holliday結構或DNA分叉點、異源雙鏈DNA，切割位點位于錯配位點5'端的第一、第二或第三個磷酸二酯鍵。此外T7EI也能以很慢的速度切割含有缺刻的雙鏈DNA。值得注意的是，T7EI可以識別長度大于或等于2個堿基對(bp)的插入、缺失或突變導致的DNA錯配，但不能識別1 bp的插入、缺失或突變。同時，T7 Endonuclease I無法識別所有的DNA錯配，對C錯配的切割效果最佳。

本品為克隆重組T7 Endonuclease I基因后在大腸桿菌中表達純化獲得的高純度蛋白，不含其他內切酶或外切酶污染。

產品組成：

保存條件: 

-20℃保存，2年有效。

產品應用：

1. 基因突變、SNP、TALEN或CRISPR/Cas9形成的突變體檢測。

2. 檢測或切割異源雙鏈DNA和切刻的DNA。

3. 隨機切割線性 DNA 進行鳥槍法克隆。

活性定義:

1活性單位是指在50 μl體系中，37℃反應1 h將1 μg超螺旋十字 形結構 pUC(AT)的90%以上轉換為線性結構所需的酶量。

蛋白純度檢測:

經SDS-PAGE凝膠電泳檢測，蛋白純度不低于95%。

非特異性內切酶活性：

在20 μl反應體系中將10 U T7 Endonuclease I與200 ng的質粒DNA在37℃共同溫育2 h后，使用瓊脂糖凝膠電泳檢測，少于 20%超螺旋質粒DNA 轉變成缺刻或線性狀態。

DNase 活性：

在20 μl反應體系中將10 U T7 Endonuclease I與15 ng的雙鏈 DNA片段在37℃共同溫育2 h后，使用瓊脂糖凝膠電泳檢測，雙鏈 DNA片段無變化。

使用方法：

1.配制退火反應體系

a. Control Template為突變型和野生型PCR產物 1:1 (各100 ng)的混合物，使用前需退火成含不配對的雜合鏈。退火后經T7EI酶切產生620 bp和175 bp條帶。

2. 使用PCR儀退火

3. T7 Endonuclease I酶切

① 37℃反應15~30 min；

② 85℃加熱15 min或加入1.5 μl的0.25 M EDTA 終止酶切反應。

4. 將酶切產物使用2%的瓊脂糖凝膠進行電泳檢測

注意事項：

1.      T7 Endonuclease I具有底物結構選擇性，以不同的活性作用于不同的DNA底物。切割特定底物時必須控制酶量和反應時間以達到最佳酶切效果。

2.      反應溫度超過42℃時會使T7 Endonuclease I非特異性核酸酶活性增強，超過55℃會導致酶活下降。

3.      Mn²⁺會顯著增加T7 Endonuclease I非特異性核酸酶活性，請使用不含Mn²⁺的PCR Buffer進行PCR擴增。

4.      T7 Endonuclease I可兼容多種PCR Buffer，PCR產物可不經過純化直接用于酶切檢測，若酶切結果異常，可以將PCR產物純化后再進行實驗。

5.      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。