BsmBI 

產(chǎn)品簡介：

BsmBI屬于Type IIs型限制酶，可識別非回文序列，并在識別序列之外進行切割，常用于 Golden Gate 組裝。經(jīng)過優(yōu)化的反應 Buffer 使 BsmBI 最大限度發(fā)揮功能，同時反應緩沖液包含重組白蛋白，其可增強多種酶的穩(wěn)定性。

識別位點：

CGTCTC(1/5)
5'...C G T C T C (N)?↓...3'
3'...G C A G A G (N)?↑...5'

同裂酶：Esp3I

注：同裂酶對于不同的甲基化修飾可能具有不同敏感性。

產(chǎn)品組成：

保存條件: 

-20℃保存，2年有效。

建議反應條件：

1× Cut Buffer C；
55℃溫育；
參照“DNA 酶切流程”配制反應體系。

失活條件：

80℃溫育20 min。

甲基化敏感性:

對于被 CpG 甲基化的 DNA，剪切可能受阻；

對于被 EcoBI 甲基化的 DNA，剪切可能受阻

活性定義:

1活性單位 (U) 是指在 50 μl 反應體系中，55℃ 1 h內(nèi)完全酶切 1 μg λDNA 所需的酶量。

超長時間溫育檢測：

最適反應溫度下，將10 U BsmBI與1 μg λDNA共同溫育3 h，未檢測到其他核酸酶污染或星號活性引起的底物非特異性降解，延時酶切可能出現(xiàn)星號活性。

酶切-連接-再酶切檢測：

最適反應溫度下，使用10 U BsmBI消化底物，回收酶切產(chǎn)物。在22℃下使用適量 T4 DNA Ligase (Fast)可以將酶切產(chǎn)物重新連接。將連接產(chǎn)物再次回收后，使用相同的內(nèi)切酶可以重新切開連接產(chǎn)物。

DNase 殘留檢測：

將10U BsmBI與雙鏈 DNA 底物在 37℃溫育 16 h，通過 DNA 電泳檢測雙鏈DNA 底物無變化。

使用方法：

1. DNA酶切流程

① 在冰上按如下建議的加樣順序配制反應體系：

a. DNA 底物中應不含苯酚、氯仿、乙醇、EDTA、洗滌劑或高濃度鹽，否則將會影響BsmBI酶活性；

② 輕柔吸打或輕彈管壁以混勻（切勿渦旋），然后瞬時離心以收集掛壁液滴；

③ 55℃溫育15 min~1 h，一般推薦5 U~10 U酶/μg 質(zhì)粒DNA、10 U~20 U酶/μg 基因組DNA，溫浴1 h，如需過夜酶切反應，請將酶量調(diào)整至1 U；

④ 80℃溫育20 min即可使酶失活，停止反應，或者通過吸附柱或苯酚/氯仿純化終止反應。

小體積推薦加樣體系：

b. 為避免蒸發(fā)，10 μl反應體系的孵育時間不應超過1 h。

不同DNA中的酶切位點數(shù)量

甲基化修飾影響

注意事項：

1.      反應體系中加入的酶體積不應超過總體積的10%，避免酶中過多的甘油引起星號活性；

2.      限制性內(nèi)切酶存儲緩沖液中的添加劑（例如甘油、鹽）與底物溶液中的污染物（例如鹽、EDTA或乙醇等）相同，反應體積越小，酶切反應抑制效應越強;

3.      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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