Nt.BstNBI

產(chǎn)品簡介：

Nt.BstNBI 是一種切刻內(nèi)切酶，僅切割 dsDNA 底物的一條鏈；在 dsDNA 底物上產(chǎn)生切口，而不切開dsDNA。

識別位點：

GAGTCNNNNN
5'...G A G T C N N N N↓N...3'
3'...C T C A G N N N N N ...5'

產(chǎn)品組成：

保存條件: 

-20℃保存，2年有效。

建議反應(yīng)條件：

1× Cut Buffer C；
55℃溫育；
參照“DNA 酶切流程”配制反應(yīng)體系。

本品在37℃進(jìn)行酶切反應(yīng)時，有100%的活性。
本品在FastCut反應(yīng)緩沖液中，有 25%的活性。

失活條件：

80℃溫育20 min。

活性定義:

1 活性單位 (U) 是指在 50 μl 反應(yīng)體系中，55℃ 1 h內(nèi)可以完全將 1 μg 的超螺旋 pUC19 DNA 轉(zhuǎn)化成開環(huán)形式所需的酶量。

超長時間溫育檢測：

將10 U Nt.BstNBI與超螺旋 pUC19 DNA 底物在 55℃溫育16 h，通過瓊脂糖凝膠電泳檢測開環(huán) DNA 無變化。

RNase 殘留檢測：

將10 U Nt.BstNBI與500 ng RNA 在37℃溫育 1 h，使用瓊脂糖凝膠電泳檢測超過 90% 的 RNA 仍保持完整。

使用方法：

1. DNA酶切流程

① 在冰上按如下建議的加樣順序配制反應(yīng)體系：

a. DNA 底物中應(yīng)不含苯酚、氯仿、乙醇、EDTA、洗滌劑或高濃度鹽，否則將會影響Nt.BstNBI酶活性；

② 輕柔吸打或輕彈管壁以混勻（切勿渦旋），然后瞬時離心以收集掛壁液滴；

③ 55℃溫育30 min~1 h；

④ 80℃溫育20 min即可使酶失活，停止反應(yīng)，或者通過吸附柱或苯酚/氯仿純化終止反應(yīng)。

不同DNA中的酶切位點數(shù)量

甲基化修飾影響

注意事項：

1.      反應(yīng)體系中加入的酶體積不應(yīng)超過總體積的10%，避免酶中過多的甘油引起星號活性；

2.      限制性內(nèi)切酶存儲緩沖液中的添加劑(例如甘油、鹽)與底物溶液中的污染物(例如鹽、EDTA或乙醇等)相同，反應(yīng)體積越小，酶切反應(yīng)抑制效應(yīng)越強。

3.      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

本產(chǎn)品僅用于生命科學(xué)研究，不得用于醫(yī)學(xué)診斷及其他用途！

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