Nb.BbvCI

產(chǎn)品簡介：

Nb.BbvCI 是一種切刻內(nèi)切酶，僅切割 dsDNA 底物的一條鏈；在 dsDNA 底物上產(chǎn)生切口，而不切開 dsDNA。Nb.BbvCI常用于核酸等溫擴(kuò)增（如SDA、RCA），由Nb.BbvCI產(chǎn)生DNA缺口，觸發(fā)聚合酶的鏈置換反應(yīng)，重復(fù)切割、置換、延伸過程從而實現(xiàn)核酸指數(shù)擴(kuò)增。

識別位點：

CCTCAGC
5'...C C T C A G C...3'
3'...G G A G T↑C G...5'

產(chǎn)品組成：

保存條件: 

-20℃保存，2年有效。

建議反應(yīng)條件：

1× FastCut Buffer；
37℃溫育；
參照“DNA 酶切流程”配制反應(yīng)體系。

失活條件：

80℃溫育20 min。

甲基化敏感性：

對于被 EcoBI 甲基化的 DNA，剪切可能受阻。

活性定義:

1活性單位(U)是指在50 μl反應(yīng)體系中，37℃ 1 h內(nèi)可以完全將 1 μg的超螺旋p615 DNA轉(zhuǎn)化成開環(huán)形式所需的酶量。

超長時間溫育檢測：

將10 U Nb.BbvCI與超螺旋 p615 DNA 底物在37℃溫育16 h，通過瓊脂糖凝膠電泳檢測開環(huán) DNA 無變化。

功能活性檢測：

37℃下，在20 μl通用FastCut 反應(yīng)體系中，10 U Nb.BbvCI能 夠在15 min內(nèi)將1 μg p615轉(zhuǎn)化成開環(huán)形式。

使用方法：

1. DNA酶切流程

① 在冰上按如下建議的加樣順序配制反應(yīng)體系：

a. DNA 底物中應(yīng)不含苯酚、氯仿、乙醇、EDTA、洗滌劑或高濃度鹽，否則將會影響Nb.BbvCI酶活性；

② 輕柔吸打或輕彈管壁以混勻（切勿渦旋），然后瞬時離心以收集掛壁液滴；

③ 37℃溫育15 min~3 h；

④ 80℃溫育20 min即可使酶失活，停止反應(yīng)，或者通過吸附柱或苯酚/氯仿純化終止反應(yīng)。

不同DNA中的酶切位點數(shù)量

甲基化修飾影響

注意事項：

1.      反應(yīng)體系中加入的酶體積不應(yīng)超過總體積的10%，避免酶中過多的甘油引起星號活性；

2.      限制性內(nèi)切酶存儲緩沖液中的添加劑(例如甘油、鹽)與底物溶液中的污染物(例如鹽、EDTA或乙醇等)相同，反應(yīng)體積越小，酶切反應(yīng)抑制效應(yīng)越強。

3.      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

本產(chǎn)品僅用于生命科學(xué)研究，不得用于醫(yī)學(xué)診斷及其他用途！

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