內質網紅色熒光探針（活細胞成像用）

ER-Tracker Red (BODIPY TR Glibenclamide), for live-cell imaging

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產品簡介：

ER-Tracker 探針是一系列具有細胞膜透過性，對活細胞內質網具有高度選擇性的探針，不像傳統的DiOC6(3)，該系列探針幾乎不對線粒體著色，且在較低濃度即可實現對內質網的染色，且對細胞幾乎無毒性。使用以下提供的優化步驟對活細胞染色后用醛固定，可以部分保留活細胞的染色特征。

本品為ER-Tracker Red (BODIPY TR Glibenclamide)，由紅色熒光染料BODIPY TR和 Glibenclamide 偶聯而成，其Ex=587nm，Em=615nm。格列本脲（Glibenclamide, glyburide），一種常用降血糖藥物，在胰島β細胞、胰島素的分泌、心肌衰竭細胞功能以及心律不齊的研究等方面具有重要科研用途。格列本脲高度結合ATP-敏感型K+通道的磺脲受體，且本受體富集存在內質網上，因此適合用作內質網熒光探針。

本品為溶于DMSO的1mM濃度ER-TrackerRed(BODIPY TR Glibenclamide)儲存液，推薦工作濃度為～1μM。我司還提供了ER-Tracker Red 稀釋液，使ER-Tracker Red的使用更加便捷。按照1:1000的比例稀釋，每10μl可以配制10mlER-Tracker Red工作液；按照1:3000的比例稀釋，每10μl可以配制30ml ER-Tracker Red工作液。

保存條件: 

-20℃避光干燥保存，至少六個月有效，避免反復凍融。

基本特性：

1)   分子式（Formula）：C₄₄H₄₂BClF₂N₆O₇S₂

2)     分子量（Molecular Weight）：915.23

3)     Ex/Em：587/615 nm 

4)     濾片（Filter）：TRITC

5)     外觀（Appearance）：液體

6)     溶解性：溶于DMSO（1mM）

7)     純度：1mM

8)     化學結構圖：

產品組成：

產品使用：（以下步驟僅做參考，具體請根據實際情況或參考文獻資料來調整）

使用前，先將本品取出回溫至室溫，并對其進行簡短離心使DMSO溶液集中于管底。最佳工作濃度需根據不同的實驗要求、細胞類型、細胞或組織的膜通透性等進行優化。

1. ER-Tracker Red工作液的配制：
(1) 取少量ER-Tracker Red按照1:1000的比例加入到ER-Tracker Red 稀釋液中。例如取1μl ER-Tracker Red加入到1ml ER-Tracker Red 稀釋液中。混勻后即為ER-Tracker Red工作液。
(2) ER-Tracker Red工作液使用前需37℃預溫育。
[注]：工作液中ER-Tracker Red的濃度可以根據實際情況進行適當調整，推薦的稀釋比例調整范圍為1:1000-1:3000。為降低背景，在染色效果可以接受的范圍內，建議盡量使用較低濃度的ER-Tracker Red。

2. 內質網的熒光標記：
(1) 去除細胞培養液，用適量的溶液如Hanks平衡鹽溶液（HBSS），含碳酸氫鈉和鈣、鎂離子 ，不含酚紅（CAT# NBS4100）洗滌生長在蓋玻片上的細胞。

(2) 去除洗滌液，加入步驟1配制好的并37℃預溫育的ER-Tracker Red染色工作液，與細胞37℃共孵育15-30分鐘。
(3) 去除ER-Tracker Red染色工作液，用細胞培養液洗滌細胞1-2次。
(4) 隨后通常用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡進行觀察。此時可觀察到內質網呈明亮的強熒光染色。
(5) 如果經ER-Tracker Red染色后的細胞需要進行固定，可以使用4%甲醛37℃固定2分鐘。固定后用適當的洗滌液洗滌2-3次，每次5分鐘，隨后可以進行復染或滴加適當的抗熒光淬滅封片液，最后封片觀察。

[注]：ER-Tracker Red染色的細胞不能用Triton X-100通透，Triton X-100通透處理會導致ER-Tracker Red的熒光染色消失。

注意事項：

1.      熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

2.      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

本產品僅用于生命科學研究，不得用于醫學診斷及其他用途！

常見問題及解答FAQ：

Q: 請問HBSS 里面的鈣鎂離子在里面起到什么作用？

A: 有利于維持細胞狀態，利于后續的染色。

Q: 請問固定后的死細胞還能染上嗎？

A: 該探針主要染的是活細胞的內質網，固定樣本基本染不上色。

Q: 染色之后可以加抗熒光淬滅劑防止熒光淬滅嗎？

A: 活細胞的染色，不需要加抗熒光淬滅封片液。

Q: 固定后的熒光還會淬滅么？或者說可以維持多長時間？

A: ER-Tracker Red 按照后附的使用說明染色后，用甲醛等固定后染色效果可以被部分保留， 熒光均會有淬滅的現象的。具體的熒光維持時間這邊沒有具體數據可參考。

Q: 請問 mito-tracker green 和 ER-traker red 是同時染還是分開依次染，染完后熒光可持續多久（也就是在多長時間內還可以檢測）？

A: 建議分開依次染色，熒光均存在淬滅的現象，染色完建議盡快在1-2h內完成檢測。

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