黃/藍色溶酶體熒光探針

LysoSensor Yellow/Blue DND-160

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產品簡介：

為滿足研究者研究活細胞內溶酶體生成和功能的動力學特征，特此開發Lysosensor探針，一種區分酸性細胞器的熒光pH指示劑。該系列染料屬于向酸性探針，由于質子化聚集在酸性細胞器上。這一質子化也使得因弱堿性側鏈而封閉熒光的探針得以熒光釋放，促使熒光信號增強。因此，LysoSensor探針遇酸后熒光信號呈現pH依賴性的增強。

LysoSensor Yellow/Blue DND-160（黃/藍色溶酶體探針）是一種獨特的比率型探針，呈現pH依賴性的雙激發和雙發射光譜峰（見Fig 1）。然而，活細胞中這一探針僅呈現pH依賴的雙發射光譜（發射波長比率~450/510nm，激發波長~365nm）。在酸性細胞器中，LysoSensor Yellow/Blue DND-160主要呈現黃色熒光，而在酸性偏低的細胞器中具有藍色熒光。雙發射波長的測定允許比率成像分析在酸性細胞器比如：溶酶體或精子頂體內的pH。其pKa值約為4.2。LysoSensor Yellow/Blue DND-160，常常簡寫成PDMPO，普遍用作海洋硅藻中二氧化硅沉積和運輸的一種示蹤劑。

本品為DMSO儲存液，濃度為1mM。用于活細胞的溶酶體染色，建議工作濃度為≥1μM，需根據實際情況做優化調整。

Fig 1. LysoSensor Yellow/Blue DND-160的pH依賴性光譜反應圖（A）熒光激發光譜（B）熒光發射光譜。

保存條件: 

-20oC避光干燥保存，12個月有效，避免反復凍融。

產品特征：

1）外觀：溶液

2）濃度：1mM in DMSO

3）亞細胞定位：溶酶體

4）顏色：黃色、藍色

5）檢測儀器：熒光顯微鏡

6）Abs（nm）：329，384nm[最大雙吸收波長，對pH敏感，見Fig 1]

7）Em（nm）：440，540nm [最大雙發射波長，對pH敏感，見Fig 1]

產品使用：

使用前，先將本品取出回溫至室溫，并對其進行簡單低速離心使溶液降至管底。第一次使用請將本品按單次用量分裝保存，≤-20°C避光干燥保存，盡量避免反復凍融。最佳工作濃度需根據不同的實驗要求、細胞類型、細胞或組織的膜通透性等進行優化。

1. 工作液的配制

利用生長培養基或合適的緩沖液將1mM儲存液稀釋至工作濃度，工作液需現配現用。對于Lysosensor系列溶酶體探針，推薦工作液濃度≥1μM；

【注意】：

1）為了降低探針加載過度可能引起的假陽性，建議在不影響染色效果的情況下盡量使用低濃度。

2）若細胞在染色后于不含染料的培養基中孵育，會觀察到熒光信號的衰減和細胞的空泡化現象。

2.染色步驟（貼壁細胞）

1）將細胞置于培養皿中的蓋玻片上，加入合適培養基，使其爬片生長。
2）待細胞生長到合適密度，吸除培養液，加入適量37℃預熱的含探針培養基（必須完全覆蓋住細胞），在適合特定細胞類型的生長條件下孵育細胞30min-2h（具體孵育時間需根據細胞類型而定）。
3）利用不含探針的新鮮培養基替換上述染色液，并且用裝有合適濾片的熒光顯微鏡進行觀察。若染色不夠充分，建議增加染料濃度或延長染色時間，使得染料能聚集在溶酶體上。

3.染色步驟（懸浮細胞）
1）離心沉淀細胞，吸除上清。
2）利用適量 37℃預熱的含探針培養基重懸細胞，在適合特定細胞類型的生長條件下孵育細胞30min-2h（具體孵育時間需根據細胞類型而定）。

3）離心，吸除染色液，加入新鮮培養基重懸細胞。
4）用裝有合適濾片的熒光顯微鏡進行觀察。若染色不夠充分，建議增加染料濃度或延長染色時間，使得染料能聚集在溶酶體上。

【注意】：另一種方法，懸浮細胞可能會粘附到經BD Cell-Tak處理的蓋玻片上，此時，可用類似于貼壁細胞的方法進行染色。

附表1. Lysotracker&Lysosensor系列溶酶體探針的光譜總結：

注意事項：

1.      整個染色過程中需注意避光。

2.      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

本產品僅用于生命科學研究，不得用于醫學診斷及其他用途！

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